Khi vịt Donald quyết định gia nhập Hải quân Hoa Kỳ, ông đã thuê chú Scrooge McDuck của mình đến chăm sóc các cháu trai của ông, Huey, Dewey, and Louie. Trong DuckTales, các nhân vật trải qua những chuyến phiêu lưu kì thú với phong cách năng động, thoải mái. Ngoài ra, chương trình còn có sự xuất hiện thường xuyên của Gyro Gearloose, một nhân vật truyện tranh đã thành danh, cũng như khách mời của Donald trong phần đầu tiên - đây là một sự xuất hiện đầy đủ, hoặc trong một cảnh khách mời khi Scrooge và các cháu của ông đọc những lá thư anh gửi cho họ, và một vài lần xuất hiện nhỏ bởi ngọn lửa cũ của Scrooge, Glittering Goldie, nhân vật được chuyển thể từ truyện tranh. Chương trình đã giới thiệu các nhân vật mới cho vũ trụ Vịt; trong khi một số trẻ vị thành niên bao gồm: bảo mẫu bà Beakley, người mà Scrooge thuê để trông nom các cháu trai; cháu gái của bà Beakley Webby; phi công Launchpad McQuack của Scrooge; Doofus Drake, một người hâm mộ Launchpad và là bạn thân của các cháu trai; và quản gia McDuck Manor, Duckworth. Phần thứ hai sau đó đã giới thiệu ba nhân vật bổ sung mới như là một phần của câu chuyện của chương trình: vịt Bubba "cileduck" và thú cưng của anh ta là Tootsie; và Fenton Crackshell, kế toán cá nhân của Scrooge, người bí mật làm việc như một siêu anh hùng tên Gizmoduck.

Hầu hết các câu chuyện được sử dụng trong chương trình đều xoay quanh một trong ba chủ đề phổ biến - phần đầu tập trung vào nỗ lực của nhóm nhằm ngăn chặn những nỗ lực của nhiều nhân vật phản diện để đánh cắp tài sản của Scrooge hoặc Dime Number One của anh ta; thứ hai tập trung vào một cuộc đua tìm kho báu; phần ba tập trung vào các nhân vật cụ thể trong chương trình. Mặc dù một số câu chuyện là nguyên bản hoặc dựa trên loạt truyện tranh của Barks, những câu chuyện khác là những câu chuyện về các câu chuyện hoặc truyền thuyết cổ điển, bao gồm các nhân vật dựa trên những người hư cấu hoặc lịch sử. DuckTales được chú ý vì có nhiều tài liệu tham khảo về văn hóa đại chúng, bao gồm Shakespeare, Jack the Ripper, thần thoại Hy Lạp, James Bond, Indiana Jones và Sherlock Holmes. Sau mùa đầu tiên, chương trình đã tránh xa những câu chuyện trên toàn cầu, với những cuộc phiêu lưu tập trung chủ yếu ở Duckberg.

Nhân vật phản diện chính của chương trình bao gồm những người trong truyện tranh: Flintheart Glomgold, người tìm cách thay thế Scrooge trở thành "con vịt giàu nhất thế giới"; Những chàng trai Beagle, những người tìm cách cướp Scrooge tài sản của anh ta và thường nhắm vào thùng tiền của anh ta; và Magica De Spell, người tìm cách đánh cắp Số một của mình. Một vài thay đổi đã được thực hiện cho những nhân vật phản diện này - không giống như truyện tranh, Flintheart là người gốc Scotland và mặc một vài bộ trang phục của Scotland, bao gồm cả một chiếc kilt; Magica, người Ý trong truyện tranh có giọng Đông Âu, cũng như một người anh tên là Poe, người đã biến thành một con quạ. Các chàng trai Beagle có tính cách cá nhân và được mẹ của họ, Ma Beagle, người đôi khi đuổi họ ra khỏi tù để thực hiện các kế hoạch với cô, nhưng luôn tránh bị cảnh sát bắt. Loạt phim hoạt hình cũng có một danh sách các nhân vật phản diện nhỏ, hầu hết trong số họ tìm cách chiếm lấy sự giàu có của Scrooge hoặc đánh bại anh ta để tìm kho báu.